一、产品简介：

　　新型冠状病毒的检测手法厉重包括核酸检测、抗体检测、抗原检测几种手法。因为抗原检测检出率较低，目前新冠检测厉重集结正在抗体和核酸检测。核酸检测目前是新型冠状病毒检测的“金法式”，拥有早期诊断、灵巧度和特异性上等特质;但抗体检测操作便捷、检测迟缓，可举动核酸诊断的添加要领。

　　一起生物除朊病毒表都含有核酸，核酸席卷脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)。新型冠状病毒(2019-nCoV)属于Beta冠状病毒属(Betacoronavirus)，该病毒是卵白包裹的单链正链RNA病毒，寄生和传染上等动物(席卷人)。病毒中特异性RNA序列是划分该病毒与其它病原体的记号物，新型冠状病毒显示后，我国科学家曾经告捷发掘了新型冠状病毒中的特异性核酸序列。如疑似患者样本中能检测到新型冠状病毒的特异性核酸序列，则以为该患者或者被新型冠状病毒传染。

　　新型冠状病毒常用的核酸诊断手法有两种：病毒核酸特异基因检测和病毒基因组测序。最常见的检测新型冠状病毒特异性核酸序列的手法是荧光定量PCR(聚集酶链式响应)。因为新型冠状病毒是RNA病毒，试剂盒检测基础都采用反转录加及时聚集酶链式响应法(RT-PCR)，扩增病原体的核酸 (RNA) ，同时通过荧光探针及时检测扩增产品。正在PCR响应系统中，包括一对特异性引物以及一个Taqman探针，该探针为一段特异性寡核苷酸序列，两头区别记号了陈诉荧光基团和淬灭荧光基团。探针完好时，陈诉基团发射的荧光信号被淬灭基团招揽;如响应系统存正在靶序列，PCR反合时探针与模板集合，DNA聚集酶沿模板操纵酶的表切酶活性将探针酶切降解，陈诉基团与淬灭基团分别，发出荧光。每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子发作。荧光定量PCR仪不妨监测出荧光来到预先设定阈值的轮回数(Ct值)与病毒核酸浓度相闭，病毒核酸浓度越高，Ct值越幼。差别坐蓐企业的产物会根据本身产物的职能确定本产物的阳性判决值。

　　因为每个RT-PCR响应须要2个幼时控造才出结果，是以，试剂盒正在开荒时普通都针对病毒序列中高度落伍的2-3个序列例如编码replicase(复造酶)或者necleocapsid(白衣，核鞘)的核酸序列安排引物，然则各个手法用的序列都不全体肖似。少少手法利用multiplex，也便是把多个方针序列正在统一响应管中扩增;另少少采用分步，先用一个方针序列筛查，阳性后再用另一个序认，如许可能有用缩短一共流程岁月，加疾检测速率。此表RNA病毒变异很疾，用多个落伍方针序列可能提防病毒变异变成的假阴性。

　　目前核准产物均基于新型冠状病毒基因组中盛开读码框1a/b(open reading frame 1ab，ORF1ab)、包膜卵白(Envelope protein，E)和核衣壳卵白(nucleocapsid protein，N)实行挑选。差别产物的检测道理基础相似，然则其引物、探针安排存正在差别，有单靶区段(ORF1ab)、双靶区段(ORF1ab、N卵白)、三靶区段(ORF1ab、N卵白和E卵白)的检测和判读区别。普通检测位于病毒ORF1ab和N基因上的两个靶标，统一份标本需知足双靶标阳性或反复检测为单靶标阳性或两种标本同时知足单靶标本事确认SARS-CoV-2病毒核酸阳性。

　　检测措施须要通过五个步伐，取样、留样、保全、核酸提取、上机检测。起初遵照试剂盒仿单实行样本采撷，样本类型席卷咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液等。因为RNA易降解，是以，采撷样本时利用无RNA酶的拭子和无RNA酶的贮存管。得回患者样本后，需尽疾实行检测，如无法速即检测须要实行低温封装，并送到特意的检测机构实行检测。检测机构收到样本后，对样本实行核酸提取，核酸提取试剂应利用核准产物仿单中指定的核酸提取试剂盒。结果是荧光PCR核酸检测，也便是上机械检测，将提取物实行荧光PCR扩增响应，须要70—80分钟。

　　病毒侵入人体后，人意会发作相应的特异性抗体实行防御。免疫球卵白是机体正在抗原物质刺激下由浆细胞发作的一类能与抗原特异性集合的血清活性因素，遵照分子构造和抗原特异性的差别，将免疫球卵白分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。

　　抗原初度进入机体后，通过肯定的暗藏期发作浆细胞并合成排泄抗体。最早显示的是IgM，但该抗体撑持岁月短、浓度低、亲和力较低，正在血中络续数日至数周，是急性期传染的诊断目标;正在IgM亲近隐没时，IgG的含量到达岑岭，IgG发作晚，但浓度高、撑持岁月长、亲和力高，血清IgG阳性提示传染中后期或既往传染，当数月甚至数年再次接触肖似抗原时，最初原抗体量稍有降低，或者是因为一片面原有抗体被再次进入的抗原所集合，从而临时消浸了抗体含量，但短期内抗体含量迟缓加添，或者比历来抗体含量高数倍至数十倍，以IgG为主，正在体内络续岁月也长，IgM很少加添。

　　本次疫情中，通过商酌者对COVID-19患者实行商酌发掘，病毒侵入人体后，IgM抗体约莫须要5-7天发作，IgG抗体正在10-15天时发作。2020年3月4日，国度卫生强健委员会颁布了最新版本的《新型冠状病毒肺炎诊疗计划(试行第七版)》正在原有诊疗计划的根基上加添了血清学检测，举动确诊病例和疑似病例的诊根除据之一。血清学检测便是通过检测血液样本中的特异性抗体IgM和IgG的存正在及含量，来间接判决体内有无病毒及病毒传染处境。目前临床中常用的抗体血清学检测手法有3种：酶联免疫吸附试验法、化学发光免疫分解法、胶体金免疫层析法。

　　ELISA是一种集合抗原、抗体特异性响应和酶对底物高效催化影响的高敏锐性免疫学实践身手。测依时，受检的标本与固相载体表表的抗原或抗体起响应。用洗涤的手法使固相载体上造成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分隔。再插手酶记号的抗原或抗体，也通过响应集合正在固相载体上。固相上的酶量与标本中的受检物质的量成比例。插手酶响应底物后，底物被催化成有色产品，产品的量与标本中受检物质的量直接闭联。于是，可遵照呈色的深浅实行半定量或定性分解。该检测手法灵巧度较高，载体法式化难度较低，但检测速率慢、易污染、步伐较为繁琐。正在本质运用中，须要遵照抗原抗体的性子安排差其余检测法，目前有双抗体夹心法、免疫压抑法、角逐法、直接法&间接法等类型。

　　是以胶体金为示踪记号物，运用于抗原抗体检测的一种新型免疫记号身手，氯金酸(HAuCl4)正在还原剂影响下，可聚集成肯定巨细的金颗粒，造成带负电的疏水胶溶液。因为静片子响而成为安定的胶体状况，故称胶体金。胶体金试纸，是将胶体金记号的生物大分子正在PVC材质的试纸固定，留加样孔，并设检测线和质料支配线。正在加样孔上插手样品后，再滴加液体介质，试纸进取行层析。遵照试纸上的免疫响应产生结果，即胶体金位子是否有赤色条带显示判决检测结果。

　　该手法无需奇特照料标本，仅需一滴血即可正在15 min内通过肉眼调查获取检测结果，打破了现有检测身手对职员、场合的束缚，缩短检测岁月，操作便利火速，正在下层医疗单元及现场检测中广博利用。目前针对新型冠状病毒，曾经报道的有两种胶体金试纸，一种是检测新型冠状病毒的抗原-双抗体夹心法，另一种是检测患者血液里特异性针对新型冠状病毒的IgM抗体-IgM缉捕法。正在疫情产生期，须要大领域做阳性检测时，适合利用总抗检测，同时联卡操作也对照简易，只须要操作一次，而分隔检测须要滴加两次样，用两次卡。

　　化学发光免疫分解法是将高灵巧度的化学发光测定身手与高特异性的免疫响应相集合，用于百般抗原、抗体、激素等检测。该法灵巧度高于ELISA，拥有特异性强、线性限造宽、结果安定、操作简化等特质，广博运用于临床标本的检测。然则该手法对摆设、操作、利用境遇的央求对照高，利用时须要配套的化学发光仪器。

　　抗体检测的灵巧度和特异度:灵巧度响应诊断试验检出传染者的才气，若过低，会显示较多假阴性结果，影响疾病的诊断、干与和预后，急急可导致患者过早逝世;特异度权衡诊断试验无误判决非传染者的才气，若过低，则会显示较多假阳性结果，导致医疗资源的奢侈，并变成患者及民多的恐慌和慌张。是以，拥有较高灵巧度和特异度是抗体检测身手的运用根基。

　　与抗体血清学检测比拟，核酸检测不妨检测遍地于窗口期的患者，赶早发掘传染者，是新型冠状病毒检测的“金法式”，然则对检测摆设或平台央求较高，高灵巧度的RT-PCR仪价钱高贵，对实践室的洁白度和操作职员央求也较高。其余，核酸检测耗时较长，切磋到样本运输、样本积存的处境，平常最疾24幼时才可能陈诉结果。

　　与核酸检测比拟，抗体血清学检测的血液标本更易获取且标性子料有保障、操作简易赶疾、很大水平上消浸了医护职员正在标本采撷和检测经过中被传染的危险、更易于下层实践室伸开筛查劳动等。假设说核酸检测病毒的核糖核酸(RNA)，是病毒存正在的直接证据，那么抗体检测的便是患者血液中被刺激发作的抗体，是间接证据，对临床有提示影响。当核酸检测阴性时，将IgM和IgG抗体检测加添进去，可能补充核酸检测容易变成漏诊的弱点。

　　目前商场上主流的抗体检测手法学是化学发光，但化学发光平台做新冠试剂并没有上风，厉重由于该手法对摆设、操作、利用境遇的央求对照高。比较核酸检测，化学发光的重点上风便是取样及操作简略，但没有火速检测的上风。针对待平淡筛查或者说针对待非焕发国度，胶体金检测手法对职员、场合、摆设央求都额表低，实用于大领域的火速检测。国际企业如罗氏、雅培等正在胶体金方面是没有身手储藏的，本质上环球的胶体金检测(席卷新冠肺炎、流行症、流感、疟疾、性病等)大片面的供应量如故正在中国。

　　抗原进入机体需通过肯定的暗藏期才会发作IgM与IgG。正在这一光阴，血清无法检出IgM与IgG，核酸检测能检测处于窗口期的患者是否受到传染。而抗体检测正在取样经过和检测岁月等方面都有核酸检测无法比拟的上风。是以正在本质检测经过中须要二者纠合检测，归纳判读，补充亏欠。遵照中国官方文献的提议，核酸检测用于检测是否受试者率领病毒，而抗体检测用于核酸检测结果阴性的疑似患者添加检测或者纠合核酸检测。新冠病毒传染检测由以核酸为主的阶段，蜕变为核酸、抗体协同检测阶段。

　　遵照武汉大学群多病院搜检科徐万洲等大夫正在2020年2月27日揭晓的《血清2019新型冠状病毒IgM和 IgG 抗体纠合检测正在新型冠状病毒传染中的诊断代价》文件中的商酌：该商酌采用回忆性商酌手法，征采 2020 年 1 月 20 日至 2020 年 2 月 17 日正在武汉大学群多病院就诊的门诊和住院患者 284 例，此中 205 例为新型冠状病毒肺炎患者，席卷 2019-nCoV 核酸检测阳性实在诊患者186例，以及 2019-nCoV 核酸检测阴性但临床症状和CT检测结果切合《新型冠状病毒肺炎防控计划(第五版)》患者19例，举动病例组。废除新型冠状病毒肺炎的其他疾病患者79例，举动比照组。

　　正在2020年3月4日颁布的《新型冠状病毒肺炎诊疗计划(试行第七版)》中，了了将抗体检测结果纳入确诊病例的诊断法式，以及疑似病例的废除法式。假设疑似病例血清特异性IgM和IgG抗体阳性，IgG抗体由阴性转为阳性或复原期较急性期有4倍及以上升高，则可能诊断其传染了新冠病毒。疑似病例的废除法式，须要同时知足病毒核酸检测结果阴性，以及发病7天后新冠病毒IgM和IgG抗体仍为阴性两个要求。

　　2020年2月21日，国度卫健委印发《新型冠状病毒肺炎防控计划(第五版)》，正在实践室检测身手指南中了了指出，核酸检测结果阴性不行废除新冠病毒传染，须要废除或者发作假阴性的成分。全部成分席卷：样性子料差，例如口咽等部位的呼吸道样本;样本征采的过早或过晚;没有无误保全、运输和照料样本;身手自身存正在的缘由，如病毒变异、PCR压抑等。

　　-被传染者的细胞中有肯定量的病毒。差别病程、差别病情患者机体中的病毒存正在量或者差别，已有病毒传染，但因为正在闭联部位采撷不到病毒或采撷到的病毒量太少，乃至现有手法检测不到，也称窗口期。

　　-采撷标本时，必需采撷到含有病毒的细胞。采撷部位失当，如采撷口咽拭子时，采撷深度不敷;采撷鼻咽拭子没有采到鼻腔深处等，采撷到的细胞或者大片面都不含病毒，即或者变成假阴性。

　　-牢靠的体表诊断试剂。国度卫健委临床搜检中央也显示，片面厂家的试剂产物因为研发岁月短，也没有利用已知临床样本实行须要的职能确认，或者存正在对试剂优化不满盈以及试剂批间区别大等题目。从试剂方面分解缘由，或者与试剂引物安排相闭，也或者与列位点检测灵巧度闭联。

　　-典范的临床核酸检测实践室(合理的分区、有才气的检测职员和庄厉的质料管束系统)。除了检测试剂自身，实践室典范与否也会对检测结果发作紧张影响。标本运输保全要求、临床实践室的典范操作、结果判读和质料支配等都是保障检测结果确凿牢靠的闭节成分。

　　检测特异抗体也可能了了患者是否“近期或既往传染过新型冠状病毒”，有帮于核酸检测阴性但临床上疑似患者实在诊。然则特异抗体检测阳性不行像病毒核酸检测阳性一律举动病毒传染的“金法式”，由于抗体检测容易受到血液标本中的少少扰乱物质，如类风湿因子、非特异IgM、溶血所致的高浓度血红卵白等的存正在而显示“假阳性”结果。

　　-溶血或红细胞标本：红细胞的细胞内液中百般酶可与底物产生非特异性响应，且血红卵白中亚铁血红素与HRP活性似乎，可催化底物，变成ELISA检测假阳性;检测区聚积造成色彩较浅的非特异性条带，扰乱目视法决断胶体金试纸结果。

　　-纤维卵白的影响：因为标本固结不全或离心转速过低、岁月太短，血清中的纤维卵白未全体析出，造成的块状或絮状物淤塞洗板机头。

　　-细菌污染标本：菌体内或者含有内源性HRP，变成ELISA假阳性结果;其余，疏水性的菌体碎片与金标粒子或缉捕抗体产生集合，影响 GICA判读。

　　-患者本身缘由：体内存正在本身抗体、嗜异性抗体等，如患有某些根基疾病或免疫性能卓殊，或长远服用某种药物，可发作卓殊卵白抗体或奇特物质，如类风湿因子、甲胎卵白、补体等，拥有肯定吸附影响，变成抗体检测假阳性。